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| Mise en évidence de l’induction de la Thymidine Phosphorylase : application à la recherche de potentielles applications cliniques (Optimization of capecitabine therapeutic use by plasmatic concentrations determinations or by thymidine phosphorylase) | ||
Montange, Damien - (2008-10-14) / Université de Franche-Comté - Mise en évidence de l’induction de la Thymidine Phosphorylase : application à la recherche de potentielles applications cliniques en : Français Directeur(s) de thèse: Royer, Bernard Laboratoire : PCP Ecole doctorale : HES Classification : Médecine et santé | ||
Mots-clés : capécitabine, 5-FU, LC-MS/MS, suivi thérapeutique pharmacologique, thymidine phosphorylase, docétaxel Résumé : La capécitabine est un anticancéreux, prodrogue inactive du 5-Fluorouracile (5-FU). Elle est facile à administrer (per os) mieux tolérée que le 5-FU et aussi efficace. Ses inconvénients sont une possible inobservance du traitement une variabilité inter-individuelle importante des concentrations plasmatiques avec une absence de corrélation avec la posologie. Le but de ce travail est d’optimiser l’utilisation de la capécitabine avec le suivi des concentrations plasmatiques et l’étude de l’impact de certains traitements sur l’activité de la Thymidine Phosphorylase (TP) enzyme synthétisant te 5-FU. Le Suivi Thérapeutique Pharmacologique nécessite une méthode de dosage spécifique, fiable et rapide. Nous en avons développé une en HPLC-MS/MS. Elle a été validée selon les critères de la FDA et l’impact des effets matrice sur la spectrométrie de masse a été minimisé. Elle facilitera le dosage des concentrations plasmatiques de la capécitabine et de ses métabolites (en routine ou en recherche). Nous avons étudié l’induction de l’activité TP par les taxanes en développant une technique de quantification de son activité par mesure du 5-FU produit. Après prétraitement de cellules de cancer du sein par du docétaxel nous avons observé une augmentation de synthèse dose-dépendante liée à une augmentation également dose-dépendante de la mortalité cellulaire. Nous n’avons pas pu mettre en évidence d’induction de la synthèse de TP par qRT-PCR ou Western Blot et avons émis l’hypothèse d'une sélection par les taxanes d’une sous-population cellulaire surexprimant naturellement la TP plus résistante aux taxanes et plus sensible à la capécitabine hypothèse qui doit être vérifiée. Résumé (anglais) : Oral anticancer drug capecitabine is an inactive prodrug of 5-Fluorouracil (5-FU). Easy administrated and well tolerated, capecitabine is an effective anticancer drug. However, capecitabine and its metabolites (including the active metabolite 5-FU) display high pharmacokinetic inter-patient variability and the orat administration should lead to poor adherence for some patients. The purpose of this work is to optimize capecitabine therapeutic use by monitoring plasmatic concentrations and to study impact of various treatments on Thymidine Phosphorylase (TP), the enzyme involved in 5-FU synthesis. Therapeutic Drug Monitoring (TDM) needs fast, specific and robust analytical method. Then we developed an LC-MS/MS method for the determination of the concentrations of capecitabine and metabolites in human plasma. This method was validated following FDA recommendations. Matrix effects were studied and their impacts on the concentration determination were minimized. This method seems usable to routinely determine concentrations of capecitabine and its metabolites in blood and may be helpful in further studies aiming at performing TDM. Induction on TP activity by taxanes (docetaxel) was studied. We developed a method to visualize Induction of 5-FU synthesis by breast tumoral cells after pretreatment by docetaxel. Induction of 5-FU was docetaxel dose was studied. Induction of 5-FU was docetaxel dose dependent and we observed a dose dependent cell mortality. However, we didn’t visualize TP induction by RT-QPCR or western blot. Then, we hypothesized that pretreatment by docetaxel selected a cellular subset with a TP overexpression. Then. this subset should be more resistant to taxanes and more sensitive to capecitabine. Identifiant : UFC-455 | ||
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