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| Contribution à l’étude de la population de neurones producteurs des peptides RFRP dans l’hypothalamus de rat. (Contribution to the stusy of the neuronal population productiong RFRP (‘RFamide-Related Peptides’) peptides in the rat hypotalamus.) | ||
Legagneux, Kevin - (2009-05-11) / Université de Franche-Comté - Contribution à l’étude de la population de neurones producteurs des peptides RFRP dans l’hypothalamus de rat. en : Français Directeur(s) de thèse: Risold, Pierre-Yves Laboratoire : E2SNC - Estrogènes, expression génique et pathologies du système nerveux central Ecole doctorale : HES Classification : Sciences de la vie, biologie, biochimie | ||
Mots-clés : Hypotalamus, RFRP, MCH, hypocrétines, neurogenèse, capsule du noyau ventromédian, comportement de défense, axe gonadotrope Résumé : Ce mémoire rapporte nos résultats concernant l’étude d’une population de neurones producteurs d’un précurseur contenant les sites de clivage pour des peptides de la famille RFamide et appelés RFRP (RFRP-1 et -3). Ces peptides identifiés récemment dans le cerveau des rongeurs ont été impliqués chez d’autres espèces de vertébrés, et notamment chez les oiseaux, dans le contrôle de l’axe gonadotrope. Les objectifs de notre travail ont concerné : l’analyse de la distribution détaillée de ces neurones dans l’hypothalamus de rat, la recherche de co-expression de RFRP avec d’autres peptides et enzymes présents dans des neurones des mêmes territoires, la genèse des neurones producteurs de RFRP pendant le développement embryonnaire de rat, la recherche de certains liens anatomiques de ces neurones avec les systèmes neuroendocrines de l’hypothalamus, et leur intégration dans des circuits impliqués dans les comportements de défense. Enfin, des résultats préliminaires ont été obtenus concernant les fonctions dans lesquelles les neurones à RFRP pourraient être impliqués chez le rat. Ne disposant pas d’outils immunologiques, toutes les études de marquage des neurones à RFRP ont été réalisées par hybridation in situ en sonde froide. La technique au 5-bromo-2’- deoxyuridine (BrdU) a été utilisée pour l’étude de la neurogenèse de cette population. Des injections de traceurs antérograde (PHA-L) et rétrograde (fluorogold) ont permis d’étudier certains circuits impliquant les neurones à RFRP. Enfin, des mesures des taux d’ARNm RFRP par RT-PCR semi-quantitative ont été réalisées chez des animaux soumis à une privation alimentaire ou à un stress aigu par confinement. Les neurones à RFRP sont distribués dans sept noyaux exclusivement hypothalamiques, et plus particulièrement la capsule du noyau ventromédian où la majorité des périkaryons sont retrouvés. Les doubles marquages ont permis de visualiser des contacts étroits avec les populations de neurones à MCH et TH, sans co-expression. En combinant la méthode au BrdU à l’hybridation in situ, nous avons montré que les neurones à RFRP sont générés en un pic unique centré sur les stades embryonnaires E13-E14. L’étude de leur développement ontogénétique a aussi montré qu’ils acquièrent leur phénotype chimique tardivement. Par les techniques de traçage rétrograde (fluorogold), nous n’avons pas confirmé les données de la littérature sur un rôle majeur des neurones à RFRP dans les fonctions neuroendocriniennes. Par des techniques de traçage antérograde (PHA-L), le noyau antérieur de l’hypothalamus et le noyau latéral du septum ont été identifiés comme des sources majeures d’innervation des neurones à RFRP. Enfin, nous avons montré des variations significatives des taux d’expression de l’ARNm RFRP suite à un stress aigu. La population de neurones à RFRP forme une ‘condensation cellulaire’ en contact étroit avec les neurones à MCH et TH. Cette population est générée en un pic étroit à E14. Cette donnée a été comparée à celles du laboratoire concernant les populations de neurones à MCH et Hcrt. Elle suggère que l’hypothalamus tubéral est formé par des vagues successives de neurogenèse de populations neuronales qui se distinguent par leur phénotype chimique (MCH, Hcrt, RFRP). Enfin, les neurones à RFRP semblent être impliqués dans des circuits liés aux comportements de stress et de défense. Résumé (anglais) : This dissertation reports our results concerning the study of a population of neurons containing precursor cleavage sites for peptide and RFamide family called RFRP (RFRP-1 and -3). These peptides recently identified in the rodent brain have been implicated in other vertebrate species, including birds, in the control of the gonadotropic axis. The objectives of our work were: the detailed analysis of the distribution of these neurons in the rat hypothalamus, research co-expression of RFRP with other peptides and enzymes present in neurons of the same territory, the genesis of RFRP-producing neurons during embryonic development of rat, looking for some anatomical connections of these neurons with neuroendocrine systems of the hypothalamus, and their integration into circuits involved in defensive behaviors. Finally, preliminary results have been obtained for functions where RFRP neurons could be involved in the rat. With no immunological tools, all tagging studies RFRP neurons were produced by in situ hybridization probe cold. Technology 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) was used for the study of neurogenesis in this population. Injections of anterograde tracers (PHA-L) and retrograde (fluorogold) have explored some circuits involving RFRP neurons. Finally, measurements of RFRP mRNA by RT-PCR semiquantitative were performed in animals subjected to food deprivation or acute stress confinement. RFRP neurons are distributed in seven hypothalamic nuclei exclusively, especially the capsule of the ventromedial nucleus where the majority of périkaryons are found. The double labeling allowed visualization close contact with populations of MCH neurons and TH without co-expression. By combining the BrdU method in situ hybridization, we showed that RFRP neurons are generated in a single peak centered on the embryonic stages E13-E14. The study of their ontogenetic development also showed that they acquire their chemical phenotype late. By retrograde tracing techniques (fluorogold), we have not confirmed the literature data on the role of RFRP neurons in neuroendocrine functions. By anterograde tracing techniques (PHA-L), the anterior nucleus of the hypothalamus and the lateral nucleus of the septum were identified as major sources of innervation of RFRP neurons. Finally, we showed significant changes in expression levels of RFRP mRNA following acute stress. The population of RFRP neurons form a 'condensation cell, in close contact with the MCH neurons and TH. This population is generated by a narrow peak at E14. This data was compared with those from the laboratory populations of MCH and Hcrt neurons. It suggests that tuberal hypothalamus is formed by successive waves of neurogenesis neuronal populations that are distinguished by their chemical phenotype (MCH, Hcrt, RFRP). Finally, RFRP neurons appear to be involved in circuits related behaviors and stress defense. Identifiant : UFC-793 | ||
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