Pseudomonas aeruginosa s’est imposé connue un pathogène hospitalier très important du fait du nombre et de la gravité des infections causées. L'objectif de cette thèse était de décrire l'épidémiologie hospitalière de P. aeruginosa, notamment celle des souches multi-résistantes en utilisant divers outils de biologie moléculaire. La première partie de cette thèse est consacrée à un tour d’horizon bibliographique. La seconde partie décrit les différentes techniques utilisées et la troisième partie rassemble les différents travaux réalisés. Le génotypage par électrophorèse en champ pulsé nous a permis d’évaluer le rôle de 1'environnement inerte dans l’épidémiologie de P. aeruginosa en réanimation puis la transmission croisée comme vecteur diffusion des souches multi-résistantes aux antibiotiques. Le typage par MultiLocus Sequence Typing d’un large panel de souches multi- résistantes isolées sur l’ensemble de l'inter-région montre qu’il existe des clones épidémiques internationaux qui ont la capacité d’accumuler les mécanismes de résistance et de diffuser dans les hôpitaux. L'hypothèse d’une population panmictique pour cette bactérie est remise en Cause par la sous-population P. aeruginosa multi-résistants hospitaliers. L’épidémiologie moléculaire est indispensable pour caractériser ces souches et définir des stratégies de contrôle. Notre travail suggère que ces stratégies de contrôle doivent associer à une politique de moindre usage des antibiotiques une prévention de la transmission croisée associant dépistage et mesures d’hygiène. Le contrôle de la multi-résistance bactérienne représente un défi d’aujourd’hui et de demain pour les différents acteurs de santé.