Dans le cadre de l’utilisation du système « gène suicide » en thérapie génique, le gène de susceptibilité HSV-tk avait été utilisé dans une approche de modulation de l’alloréactivité après greffe de moelle osseuse. Ce modèle a montré ses limites et notre laboratoire s’est orienté vers l’utilisation du système CD20/Rituximab (RTX). En tant que protéine membranaire, la molécule CD20 permet un tri des cellules génétiquement modifiées ; de plus elle est la cible d’un anticorps monoclonal, le RTX, permettant la lyse des cellules exprimant cet antigène. Dans cette thématique, nous nous sommes intéressés à l’existence d’une population de lymphocytes T exprimant CD20. En effet, la molécule CD20 normalement exprimée sur les lymphocytes B, a été décrite, comme étant présente sur un petit contingent de LT. Nous avons émis l’hypothèse que cette population pouvait être un artefact observé en cytométrie en flux. Dans un deuxième temps, un épissage alternatif du gène CD20 a été mis en évidence au laboratoire, codant un ARNm tronqué (nommé ΔCD20). Cet ARNm est lié à l’activation et/ou à la transformation cellulaire. Ce travail a donc consisté en la caractérisation de cet ARNm ΔCD20 et en la mise en évidence de la protéine codée par cet ARNm. CD20 étant la cible du traitement par RTX, nous avons également mis en relation la présence de cet ARNm avec les résistances au traitement. La dernière partie des résultats concerne l’exploration d’une approche d’immunothérapie anti-tumorale ciblant cette protéine ΔCD20. Nous avons ainsi généré des LT spécifiques de ΔCD20. Le but à long terme de cette stratégie serait d’améliorer le traitement des patientsréfractaires au traitement par RTX et/ou en rechute.

L'athérosclérose, l’insulino-résistance a l‘origine du diabète post-transplantation, les pathologies néoplasiques et la dysfonction chronique du greffon sont actuellement reconnues comme étant des pathologies inflammatoires chroniques et représentent des complications fréquentes après transplantation rénale. Celles ci ont par ailleurs un impact important sur la Morbi-mortalite des patients. Ces différentes pathologies font intervenir plusieurs acteurs de L’immunité innée. Nous avons étudié, par le biais d'études de polymorphisme, l'influence potentielle de 4 candidats tous impliqués dans la réponse inflammatoire: ll-6, Cyclooxygénase-2 (COX-2), CX3CR1 (recepteur de CX3CR1 ou fractalkine) et NOD2. Nos travaux montrent que les mutations affectant le promoteur du gène de l'lL-6 sont associées a la survenue d’un diabète après transplantation rénale. Les mutations affectant le promoteur du gène COX-2 sont, elles, associées a la dysfonction chronique du greffon. Enfin, les mutations affectant le gène de CX3CRl sont associées au risque de survenue du cancer. Les variants génétiques de l’immunité innée, impliqués dans la réponse inflammatoire, jouent donc un rôle dans les complications survenant après transplantation rénale.

Les lymphocytes NK sont des cellules du système immunitaire inné décrites pour leurs rôles essentiels dans la réponse anti-bactérienne, antivirale et plus récemment anti-tumorale. En effet, les cellules NK présentent des fonctions « d’immunosurveillance ». Elles sont capables de cytotoxicité directe à l’encontre des cellules tumorales et peuvent produire de grandes quantités d’IFN-_, un agent cytostatique, pour contenir l’avancement tumoral. Pourtant, en dépit de ces fonctions, on ne peut que constater le développement de tumeur chez les patients immunocompétents. Cette réalité peut être expliquée de manière rationnelle par le concept des 3E de l’immunosurveillance, à savoir : Elimination, Equilibre et Evasion ; Si la première étape a été largement documentée, la compréhension de la phase d’équilibre, transition critique permettant à terme l’échappement du cancer à l’immunité anti-tumorale, n’a pas été autant étudié. Au cours de notre thèse, nous avons émis l’hypothèse de travail selon laquelle certaines protéines oncogéniques seraient capables de promouvoir des voies d’évasion immunitaire. Plus précisément, Notre thèse de sciences a pour objectif de déterminer les facteurs oncogéniques activés par les cellules tumorales pour prévenir les fonctions anti-tumorales des lymphocytes NK. Nous avons pu évaluer l’implication de STAT3, un facteur de transcription pro-oncogénique, dans l’immuno-modulation de l’immunité innée NK. Les résultats présentés ici mettent en évidence l’implication de STAT3 dans la régulation transcriptionnelle de la protéine MICA, un ligand activateur des NK reconnus par NKG2D, et les conséquences de cette régulation sur les fonctions d’immunosurveillance NK.

Une élévation de la quantité de microparticules endothéliales circulantes (MPE) témoignant d’une altération de l’endothélium vasculaire et le recrutement de cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) sont communément impliqués dans différentes pathologies inflammatoires. Or les interactions potentielles entre MPE et pDC ne sont pas connues, et cela constitue l’objectif de notre travail. Nous avons montré in vitro que des MPE générées à partir de lignées cellulaires endothéliales, pouvaient induire la maturation phénotypique de pDC humaines. L’augmentation de l’expression des molécules de maturation et de costimulation à la surface des pDC s’accompagne d’une sécrétion de cytokines inflammatoires. De plus les pDC ainsi maturées sont fonctionnellement matures puisqu’elles induisent la prolifération des lymphocytes T CD4+ naïfs qui s’orientent vers un profil de sécrétion cytokinique de type 1. Des microparticules d’autre origine n’induisent pas la maturation des pDC, suggérant que cette capacité est spécifique aux MPE. Par ailleurs, les MPE n’activent pas les cellules dendritiques dérivées de monocytes (Mo-DC). Afin de comprendre les mécanismes d’interaction DC/MPE, nous avons recherché l’expression de récepteurs à la phosphatidylsérine à la surface des cellules dendritiques. Nos résultats préliminaires montrent une expression isolée de BAI-1 sur les pDC qui pourrait potentiellement être impliqué dans la prise en charge des MPE par les pDC. Les MPE pourraient ainsi constituer une nouvelle « alarmine » capable d’induire de façon inappropriée l’activation des pDC et par ce biais participer à la physiopathologie de désordres inflammatoires. L’implication des MPE dans un nombre de plus en plus important de pathologies, nous a conduits à valider la technique de quantification des MPE plasmatiques par cytométrie de flux dans une cohorte de sujets normaux et de patients atteints de psoriasis. La poursuite de la standardisation de la quantification des MPE permettra d’obtenir un nouveau biomarqueur utile au diagnostic ou à l’immunomonitoring de différentes pathologies dans lesquelles les MP sont impliquées.

Les complications athéromateuses sont fréquentes chez le transplanté rénal. L’athérosclérose est une maladie inflammatoire où tous les éléments de la réponse immune peuvent intervenir. Le transplanté rénal constitue un modèle d’étude particulièrement intéressant puisqu’il cumule un risque de complications athéromateuses élevé et un état variable d’immunosuppression obtenu par l’utilisation de molécules ayant des mécanismes d’action différents sur la réponse immunitaire. Nous avons étudié le rôle de l’immunité innée et de la polarisation lymphocytaire dans la survenue de complications athéromateuses. Nous avons montré que les mutations affectant TLR4 réduisaient le risque de complications athéromateuses et que l’existence d’une lymphopénie T CD4 était un facteur de risque de complications athéromateuses. Cette lymphopénie T CD4 peut être prédite par l’estimation de la fonction thymique quantifiée par le nombre de TREC. Enfin, nous avons étudié l’impact de la réponse inflammatoire sur le risque de survenue de diabète de novo post-transplantation, un facteur de risque cardio-vasculaire important après greffe.

La greffe de Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) représente une alternative thérapeutique majeure dans le traitement de certaines hémopathies. Les CSH peuvent être obtenues par mobilisation des cellules souches périphériques (CSP) sanguines par le facteur de croissance des granuleux : le G-CSF. Les effets immunologiques de la mobilisation par G-CSF à court terme chez le donneur sont connus, en revanche, ses effets à long terme le sont moins. Nous avons réalisé une étude sur 24 donneurs afin d'observer les altérations induites par cette mobilisation. Des échantillons sanguins sont prélevés avant, au moment et 1, 3, 6 et 12 mois après la mobilisation. Le nombre de certaines cellules sanguines et de leur capacité à produire des cytokines ou des immunoglobulines sont perturbés par la mobilisation mais retrouve des valeurs normales 3 à 6 mois après. En revanche, la mobilisation par G-CSF est associée avec une aneuploidie des cellules CD34- persistante au delà de 6 mois post-mobilisation. Le risque à long terme de l'administration de G-CSF devra être plus amplement étudié. La transplantation de CSP après conditionnement d'intensité réduite entraine moins de toxicité immédiate. Nous avons étudié plusieurs paramètres post-greffe de 20 receveurs. La prise de greffe était rapide, le nombre de cellules CD8 est revenu à une valeur normale 4 mois après greffe alors que la reconstitution des cellules CD4 est beaucoup plus lente. Plusieurs résultats (nombre de TREC, nombre de cellules mémoires...) montrent que ce type de greffe favorise une reconstitution par expansion périphérique des cellules T qui avec d'autres cellules peuvent limiter la survenue d'infections post-transplantation.

Dans la civilisation d’aujourd’hui, l’usage de produits dermo-cosmétiques (PDC), par l’Homme, est un besoin quotidien indispensable. La plupart des personnes, surtout les femmes, sont des consommatrices actives des PDC à cause du culte de l’apparence physique et la civilisation du " Look ". Lors de l’achat d’un PDC, le consommateur s’intéresse essentiellement à deux critères très importants selon lui. Il tient compte de l’efficacité du PDC et de sa sécurité à court et à long terme. L’objectif de notre travail de thèse était de protéger les consommateurs en assurant l’efficacité des PDC et surtout éviter les risques de toxicités aigues et chroniques. Ce travail est divisé en trois parties : Une comparaison entre différentes techniques de quantification du microrelief cutané (in vitro et in vivo) pour vérifier la sensibilité des méthodes contrôlant l’efficacité des PDC. Etudes de la pénétration cutanée des molécules suspectes utilisées en cosmétique (les parabènes), incorporées dans une lotion commercialisée en pharmacie. Notre objectif était de déterminer les quantités des parabènes qui traversent l’épiderme et le derme et joignants la circulation générale. Etablir une comparaison entre les législations des PDC d’aujourd’hui et l’état réelle de leurs utilisations par les consommateurs.