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Université de Franche-Comté
/ 18-12-2008
Berthier Alexandre
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Les estrogènes contribuent au contrôle de l’expression de nombreux gènes cibles en interagissant avec les Récepteurs aux Estrogènes (RE). Ces récepteurs sont des facteurs de transcription qui interagissent avec une séquence cis-régulatrice, appelée Elément de Réponse aux Estrogènes (ERE). Un criblage de molécules capables de lier les RE et de moduler l’expression génique apporte un intérêt thérapeutique (ménopause, cancers hormonodépendant) et des intérêts dans les domaines de la santé publique et de l’écologie (perturbateurs endocriniens). Nous avons développé deux modèles de biocapteurs reposant sur le principe de Résonance Plasmonique de Surface. Une telle démarche permet de réduire le coût et le temps expérimental nécessaire au criblage d’une chimiothèque. Par ailleurs, la validation de l’utilisation de tels outils nécessite la corrélation des résultats à ceux obtenus à l’aide d’un modèle biologique plus complexe. Ainsi, nous avons développé, un modèle de cellules humaines de cancer du sein (MCF-7) transfectées par un vecteur rapporteur. La mise en place en parallèle de ces deux modèles a permit d’identifier un nouveau phytoestrogène agoniste de REα : la 7-O-β-Dglucopyranolychrysine. L’un de nos biocapteurs est compatible avec l’étude des interactions protéines/protéines. Nous avons donc appliqué ce modèle à la recherche de partenaires de la protéine GEC1 codé par un gène régulé par les estrogènes. En conclusion, nous avons développé en parallèle des biocapteurs ADN/protéine et un modèle cellulaire permettant l’identification de xénoestrogènes (7-O-β-D-glucopyranolychrysine), ainsi qu’un biocapteur protéines/protéines permettant le criblage de partenaires protéiques.
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Université de Franche-Comté
/ 16-12-2008
Mahemuti Ailiman
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Dans les pays occidentaux, les manifestations thromboemboliques induisent une morbidité et une mortalité majeure. De part leur diversité d'expression clinique, les thromboses concernent en effet de nombreuses disciplines cliniques : angiologie, anesthésiologie, cardiologie, gynécologie obstétrique, hématologie, médecine interne,neurologie... Donc, la maladie thrombotique atteint le système veineux, où le débit et la pression sanguine sont faibles mais aussi le système artériel, où ces deux paramètres sont élevés. La composition du thrombus (riche en plaquettes dans les artères et riche en fibrine dans la veine) et la présence d'une lésion de la paroi vasculaire (athérome dans la thrombose artérielle), différencient la thrombose veineuse de la thrombose artérielle. Toutefois, les distinctions ne sont pas absolues et il existe des mécanismes communs. L'activation anormale de l'hémostase est au cœur de l'initiation de toutes les thromboses. Cette activation anormale peut être favorisée par une prédisposition génétique, présente durant toute la vie. Elle peut, par ailleurs, être favorisée par les effets transitoires ou prolongés, immédiats ou retardés, de facteurs environnementaux capables de moduler le risque artériel ou veineux. Les techniques d'imagerie de plus en plus précises constituent un support indispensable à l'approche clinique des maladies vasculaires. En parallèle la biologie a apporté aux cliniciens de nouveaux outils permettant de mieux comprendre comment se développe la thrombose et pourquoi certains sujets sont plus exposés au risque de thrombose, artérielle ou veineuse. Cette définition des profils de risque thrombotique doit permettre à terme une meilleure prise en charge thérapeutique, reposant sur des consensus issus d'études cliniques rigoureuses.
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Université de Franche-Comté
/ 24-11-2008
Pellegrin Maxime
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L’athérosclérose, pathologie inflammatoire artérielle chronique, est à l’origine de la plupart des maladies cardiovasculaires qui constituent l’une des premières causes de morbidité et mortalité en France. Les études observationnelles et expérimentales montrent que l’exercice physique prévient la mortalité cardiovasculaire. Cependant, les mécanismes précisant les bénéfices cliniques de l’exercice sur l’athérosclérose sont encore largement inconnus. Le but général de ce travail a donc été d’explorer, en utilisant un modèle expérimental d’athérosclérose, la souris hypercholestérolémique génétiquement dépourvue en apolipoprotéine E, les mécanismes athéro-protecteurs de l’exercice. La dysfonction endothéliale, généralement associée aux facteurs de risque cardiovasculaire, serait l’une des étapes précoces majeures de l’athérogenèse. Elle est caractérisée par une diminution de la biodisponibilité en monoxyde d’azote (NO) avec la perte de ses propriétés vasculo protectrices, ce qui favorise un climat pro athérogène (stress oxydatif, adhésion et infiltration des cellules inflammatoires dans la paroi artérielle…) conduisant à la formation de la plaque athéromateuse. L’objectif de notre premier travail a donc été d’explorer les effets de l’exercice d’une part, sur le développement des plaques athéromateuses et d’autre part, sur la fonction endothéliale de la souris dépourvue en apolipoprotéine E. Nos résultats montrent que l’exercice réduit significativement l’extension de l’athérosclérose et prévient la dysfonction endothéliale. L’explication pharmacologique montre que l’exercice stimule la fonction endothéliale via, notamment, une plus grande sensibilité des récepteurs endothéliaux muscariniques, ce qui active les événements signalétiques cellulaires récepteurs-dépendants à l’origine d’une bioactivité accrue de NO. Les complications cliniques graves de l’athérosclérose sont induites par la rupture de la plaque instable provoquant la formation d’un thrombus occlusif et l’ischémie du territoire tissulaire en aval. L’objectif de notre deuxième travail a été d’examiner l’effet de l’exercice sur la qualité stabilité de la plaque. Nos résultats indiquent que l’exercice de longue durée stabilise la plaque en augmentant le nombre de cellules musculaires lisses et en diminuant le nombre de macrophages intra-plaques. Nos résultats montrent aussi que la phosphorylation de la eNOS (NO Synthase endothéliale) Akt dépendante n’est pas le mécanisme moléculaire majeur à l’origine de ce bénéfice. Enfin, dans notre troisième travail, nous avons investigué l’effet de l’exercice sur le développement de la plaque vulnérable. Nos résultats montrent, chez un modèle murin de plaque instable (modèle d’hypertension rénovasculaire à rénine et angiotensine II élevés) que l’exercice prévient l’apparition de la plaque vulnérable indépendamment d’un effet hémodynamique. Ce bénéfice serait associé à une diminution de l’expression vasculaire des récepteurs AT1 de l’Angiotensine II. Nos résultats justifient l’importance de l’exercice comme outil préventif des maladies cardiovasculaires.
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Université de Franche-Comté
/ 20-10-2008
Dumrongsak Pekthong
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L’utilisation des plantes comme alternative et/ou complément à un traitement médicamenteux classique devient actuellement populaire. Du fait de la prise conjointe de médicament et de plantes, l’interaction plantes/médicaments est envisageable en pharmacocinétique et en pharmacodynamique. Les patients pratiquent également une automédication avec plusieurs plantes ou préparations à bases de plantes, conjointement au traitement médical. Croyant cette pratique sure, l’automédication est le plus souvent faite sans même en avertir le médecin traitant. Il est donc important d’identifier les interactions plantes/médicament potentielles afin de prendre toutes les précautions qui s’imposent pour l’administration de plantes. Andrographis paniculata - plante de la famille des Acanthaceae - est un exemple de plante médicinale utilisée depuis plusieurs siècle en Asie pour traiter les maladies chroniques et infectieuses. Dans une première partie de ce travail sont présentées successivement une revue sur d’Andrographis paniculata, une sur la biotransformation des xénobiotiques, particulièrement celle des cytochromes P450, l’enzyme la plus importante du métabolise des xénobiotiques, et enfin une sur des exemples d’interactions plante/médicament. Dans une seconde partie, les résultats expérimentaux sont présentés. Ils peuvent être résumés de la manière suivante : les effets de l'extrait hydroalcoolique d’Andrographis paniculata (EAP), plante largement utilisée en médecine Thaïlandaise, et de son diterpène majoritaire, l’Andrographolide (AND), sur l'activité des CYPs hépatiques ont été examinés in vivo et in vitro chez le rat et in vitro chez l'Homme. In vitro, dans les microsomes hépatiques, l’EAP inhibe l’hydroxylation CYP2C-dependante du tolbutamide avec un Ki respectivement de 8,21 pour le rat et 7,51 μM pour l'Homme. Le mode d'inhibition est de type mixte mais probablement non métabolisme-dépendant. Après administration d’EAP et d’AND in vivo chez le rat, l’expression et l’activité du CYP2C11 ont significativement varié: une diminution de 30% de l’activité CYP2C11 a été observée à 0,5 et à 2,5 g d’EAP/kg/jour (correspondant respectivement à 5 et 25 mg d’AND/kg/jour), par rapport au groupe contrôle, ainsi qu’une diminution d'expression de l’isoforme CYP2C11. À 5 et 25 mg d’AND pur /kg/jour, l’activité CYP2C11-dependante est diminuée de 50% par rapport au contrôle. In vitro dans les cultures primaires d’hépatocytes de rat et humains, incubées avec 50 μM d’AND ou d’EAP, d’importantes diminutions des niveaux d'activité et de l’expression des ARNms des CYP2C et CYP3A ont également été mises en évidence. En conclusion, la présente étude montre qu’il n’est pas exclu que l'extrait d’Andrographis paniculata (EAP) ainsi que son diterpène majoritaire (AND), puissent provoquer chez l'Homme des interactions médicamenteuses en cas de co-administration avec des médicaments classiques, ceci par inhibition de l’expression et de l’activité des CYP2C9 et CYP3A4.
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Université de Franche-Comté
/ 14-10-2008
Montange Damien
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La capécitabine est un anticancéreux, prodrogue inactive du 5-Fluorouracile (5-FU). Elle est facile à administrer (per os) mieux tolérée que le 5-FU et aussi efficace. Ses inconvénients sont une possible inobservance du traitement une variabilité inter-individuelle importante des concentrations plasmatiques avec une absence de corrélation avec la posologie. Le but de ce travail est d’optimiser l’utilisation de la capécitabine avec le suivi des concentrations plasmatiques et l’étude de l’impact de certains traitements sur l’activité de la Thymidine
Phosphorylase (TP) enzyme synthétisant te 5-FU. Le Suivi Thérapeutique Pharmacologique nécessite une méthode de dosage spécifique, fiable et rapide. Nous en avons développé une en HPLC-MS/MS. Elle a été validée selon les critères de la FDA et l’impact des effets matrice sur la spectrométrie de masse a été minimisé. Elle facilitera le dosage des concentrations plasmatiques de la capécitabine et de ses métabolites (en routine ou en recherche). Nous avons étudié l’induction de l’activité TP par les taxanes en développant une technique de quantification de son activité par mesure du 5-FU produit. Après prétraitement de cellules de cancer du sein par du docétaxel nous avons observé une augmentation de synthèse dose-dépendante liée à une augmentation également dose-dépendante de la mortalité cellulaire.
Nous n’avons pas pu mettre en évidence d’induction de la synthèse de TP par qRT-PCR ou Western Blot et avons émis l’hypothèse d'une sélection par les taxanes d’une sous-population cellulaire surexprimant naturellement la TP plus résistante aux taxanes et plus sensible à la capécitabine hypothèse qui doit être vérifiée.
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Université de Franche-Comté
/ 09-07-2008
Knapp Jenny
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Echinococcus multilocularis est un parasite nécessitant pour survivre un passage successif entre les carnivores, comme le renard et les micro-mammifères. Le parasite est responsable chez l’homme de l’Echinococcose alvéolaire, une maladie mortelle si elle n’est pas prise en charge. Uniquement décrit dans l’hémisphère nord (Chine, Japon, Europe et Amérique du Nord), la distribution spatiale du parasite semble connaître une évolution récente, notamment en Europe, où l’Arc alpin est décrit comme le foyer historique d’E. multilocularis dans cette région. Le génotypage a été choisi pour étudier la diffusion du parasite en Europe. Cependant, le manque d’outils de détection du polymorphisme du parasite nécessitait la recherche et la caractérisation de marqueurs possédant un haut pouvoir discriminant. Après caractérisation et validation de la cible EmsB multilocus répétée en tandem, la diversité génétique du parasite en Europe a été étudiée à différentes échelles spatiales d’analyse. A l’échelle micro-locale (rongeurs parasités d’une même pâture), les isolats présentaient une faible diversité génétique entre eux, évoquant une contamination des rongeurs par une même source infectieuse (e.g. les fèces d’un même renard parasité). A l’échelle locale (900 km²), 140 parasites de 25 renards ont été étudiés. Les parasites présentaient une diversité génétique permettant de distinguer 6 profils EmsB. La présence simultanée de différents profils chez le renard a été décrite de manière fréquente, évoquant des infestations répétées des renards. Un faible taux d’hétérozygotie a été trouvé chez le parasite, ce qui pourrait être expliqué par un mode de reproduction principalement clonal. A l’échelle continentale (9 sous-régions européennes de la zone endémique historique et de la périphérie de celle-ci) la diversité génétique et la structure spatiale du polymorphisme ont été étudiées à partir de 653 isolats (596 vers adultes isolés de 129 renards, 57 lésions opérés chez des patients et des animaux vivant en captivité). Une grande diversité génétique a été observée en Europe, avec la description de 54 profils EmsB. Des profils transversaux ont été trouvés de part et d’autre de la zone d’étude alors que d’autres plus endémiques étaient limités spatialement. L’étude de la composition génétique au sein des sous-régions européennes a permis de mettre en évidence une plus grande diversité génétique dans le foyer historique par rapport à sa zone périphérique, où quelques profils représentaient la majorité des parasites. Cette distribution évoque une dispersion du parasite à partir de la zone centrale vers la zone périphérique dans un système de transmission « continent-île ». Chez l’homme et l’animal en captivité des profils EmsB décrits comme endémiques ont été trouvés sur plusieurs années, montrant une contamination de manière locale par une même souche. Cette étude constitue la première application d’un marqueur microsatellite multilocus pour l’étude de la circulation d’un helminthe à l’échelle continentale.
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Université de Franche-Comté
/ 26-06-2008
Adam Olivier
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Afin de les protéger des attaques des champignons et des coléoptères, les bois d'oeuvre issus de résineux sont traités par des fongicides et/ou des insecticides lors d'une ou de plusieurs étapes de leur transformation. Ces derniers sont le plus fréquemment la cyperméthrine et la deltarnéthrine (insecticides de la famille des pyréthrinoïdes de synthèse), le 3-Iodo-2-propynyl but yI carbamate (IPBC, fongicide/bactéricide appartenant à la famille des carbamates), ainsi que le propiconazole et le tébuconazole (fongicides de la classe des triazolés). Or, pour des raisons historiques, les scieries de résineux sont souvent implantées en tête de bassin, en bordure de petits cours d'eau particulièrement vulnérables. Le présent travail a pour objectif de contribuer à une meilleure compréhension des perturbations engendrées par ces installations de traitement du bois sur les milieux aquatiques environnants, en particulier vis-à-vis des populations de Gammarus pulex et Gammarus fossarum (Crustacé, Amphipode). Dans cette perspective trois approches complémentaires ont été développées. L'approche chimique a permis de qualifier certains processus liés à l'adsorption d'une matière active fréquemment employée dans le traitement du bois, le propiconazole, sur un matériau standard, le charbon actif. Cette approche a aussi eu pour objet le développement d'une méthode de dosage des pesticides étudiés dans la matrice sédimentaire. Les limites de détections atteintes sont comprises entre 0,3 et 3,3 [micron]g.Kg-1. Cette méthode a été utilisée. avec succès pour caractériser le niveau de contamination sédimentaire d'un système aquatique situé à proximité d'une aire de traitement du bois. La présence récurrente de produits de préservation du bois a ainsi été observée sur plusieurs kilomètres à l'aval des installations de traitement. L'approche hydro-écologique a permis de quantifier l'impact in natura d'aires de traitement du bois sur des populations de G. pulex et G. fossarum. Une sévère réduction des densités et une altération du cycle de vie de ces espèces ont ainsi pu être observées, cela de façon durable et sur plusieurs kilomètres à l'aval des installations de traitement. De plus, les densités d'adultes ont été réduites dès l'aval proche, alors que les densités de juvéniles le sont sur une plus grande distance. L'approche écotoxicologique a rendu compte de la sensibilité de \es deux espèces à des matières actives parmi les plus employées dans le cadre du traitement du bois. La létalité de ces substances en mélange pour G. pulex est renforcée par une synergie opérant à certains ratios et par la présence d'adjuvants dans les solutions de traitement commerciales. De plus, des variations de sensibilité des populations ont été observées selon leur origine géographique et le stade de développement considéré, les juvéniles étant plus sensibles que les adultes. La présente étude permet de mieux appréhender les réponses des populations de G. pulex et G. fossarum aux perturbations engendrées par les aires de traitement du bois. La vulnérabilité de ces organismes est discutée, en particulier dans des environnements contaminés par des concentrations en produits de traitement du bois proches des limites de détection de la méthode de dosage développée. L'utilisation de ces taxons à des fins bioindicatrices, notamment en relation avec d'autres taxons macrobenthiques, est également discutée, de même que les perspectives de développement du présent travail.
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Université de Franche-Comté
/ 07-01-2008
Hu Wei
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L´utilisation non conventionnelle de l’échographie endovasculaire (IVUS) n’est pas suffisamment documentée dans la littérature médicale. Nous avons étudié deux utilisations non conventionnelles différentes de l΄IVUS. Dans une première phase, nous avons évalué l’intérêt potentiel de l΄IVUS chez les malades avec syndrome aortique aigu (SAA). Dans la 2° phase, nous avons utilisé l’histologie virtuelle (IVUS-VH) pour quantifier les changements de composition de la plaque après angioplastie au ballon (angioplastie). Dans la phase 1, IVUS a été réalisé chez 16 patients consécutifs avec une suspicion ou un diagnostic confirmé de SAA, en utilisant une sonde 9 MHz. Les résultats ont été comparés à une imagerie par aortographie, échographie transoesophagienne, scanner et imagerie par résonance magnétique. Dans la phase 2, IVUS-VH a été réalisé chez 20 patients consécutifs avec syndrome coronarien aigu avant et après angioplastie. Les changements quantitatifs et qualitatifs des plaques ont été identifiés en comparant les images pré- et post-angioplastie. Dans la phase 1, la sécurité d’emploi de l΄IVUS était appropriée. La sensibilité de l’IVUS pour déceler les SAA est de presque 100%. Dans 12/15 patients (80%), l’IVUS fournit des informations diagnostiques utiles supplémentaires au-delà des autres techniques d’imagerie. Dans la phase 2, l’angioplastie a permis une augmentation de 80% de la superficie à la coupe de section (L-CSA), expliquée pour 35% par une augmentation du vaisseau CSA, et pour 65% par une diminution de la surface de la plaque, à cause d’une redistribution longitudinale. Le tissu fibreux et fibrolipidique été capable de se déplacer longitudinalement, mais le tissu calcique reste au même niveau. Environ un tiers du tissu nécrotique a été perdu après angioplastie, suggérant la présence d’un processus d’embolisation. L´IVUS fournit des informations utiles supplémentaires au-delà des autres techniques d’imagerie chez les patients avec suspicion ou diagnostic de SAA. Après angioplastie, l´augmentation de la lumière peut être expliqué pour 35% par une augmentation du vaisseau CSA et pour 65% par une diminution de la plaque, qui est le résultat d’une redistribution longitudinale du tissu fibreux et fibrolipidique et la disparition d’un tiers du tissu nécrotique présent à l’inclusion.
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Université de Franche-Comté
/ 11-12-2007
Aubry Sébastien
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Les progrès technologiques de la tomodensitométrie en terme de résolution spatiale font que, devant la masse croissante des données à interpréter, les radiologues doivent travailler sur des consoles informatiques post-traitement dédiées. Cette évolution récente n’a pas été répercutée sur les méthodes d’enseignement de la radio-anatomie et de la radiologie interventionnelle sous guidage tomodensitométrique (TDM). Dans un premier temps nous avons modélisé les vertèbres types puis nous avons développé un logiciel dont l’ergonomie et le design sont directement inspirés de ceux utilisés dans les services de radiologie. Il gère les acquisitions TDM comme un volume dont l’interprétation se fait en reconstruction multi-planaire. Il permet de construire et d’analyser à partir de leurs parties élémentaires constitutives, les vertèbres issues de la modélisation 3D. Il est une nouvelle modalité d’apprentissage de l’anatomie, plus attractive, complète et didactique. Parallèlement, la radiologie interventionnelle sous guidage TDM n’a cessé de se développer, que se soit à visée diagnostique ou thérapeutique. L’efficacité et la sécurité de ces interventions sont liées à la bonne connaissance par le radiologue interventionnel du trajet et des rapports des aiguilles. Nous avons modélisé au sein du volume réel des objets virtuels et ainsi stimulé les procédures typiques réalisées sous guidage TDM à visée rachidienne ou péri-rachidienne. Ceci permet aux radiologues interventionnels de mieux appréhender dans l’espace les gestes à accomplir.
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Université de Franche-Comté
/ 26-11-2007
Guis Hélène
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Ces dernières années, l’émergence (ou la ré-émergence) de pathologies pour l’homme et pour l’animal sur le pourtour méditerranéen mobilisent les scientifiques et les pouvoirs publics. On émet l’hypothèse que celle-ci est l’une des conséquences des changements climatiques et des transformations induites par les activités humaines dans les écosystèmes d'accueil. Beaucoup de ces maladies sont transmises par des arthropodes vecteurs à travers des cycles épidémiologiques complexes mettant en interaction de nombreuses composantes de l'environnement. Objectifs : L’objectif de ce projet est de rechercher, décrire et analyser les conditions nécessaires à l’implantation et la multiplication d’un vecteur et de la pathologie associée, dans un nouvel environnement. La fièvre catarrhale ovine, maladie vectorielle d’actualité, constitue un modèle pertinent et approprié pour développer cette approche. Sa récente propagation à travers le bassin méditerranéen a été spectaculaire et sa présence actuelle en Corse représente une menace très sérieuse pour l’élevage du territoire continental. Protocole : Les unités paysagères favorables aux vecteurs seront étudiées à deux niveaux : les habitats des Culicoides seront caractérisés sur le terrain puis mis en relation avec des données de télédétection. Ceci permettra d’identifier les zones favorables aux Culicoides en Corse et de rechercher les variables expliquant leur répartition pour en déduire un modèle de fonctionnement. L’étude de l’espace agricole et de la répartition des troupeaux permettra de proposer un modèle similaire, non plus à l’échelle du vecteur mais à l’échelle de la maladie. La confrontation des résultats avec la situation existante en Sardaigne permettra de valider le modèle. Cette démarche sera alors appliquée dans un territoire indemne afin de déterminer les zones à risque propices à la survie et à la sédentarisation des Culicoides, zones à surveiller en priorité. Ces procédures seront développées sur le bassin méditerranéen, avec des données à basse résolution, ce qui permettra d’étudier une région beaucoup plus grande, mais aussi d’explorer les procédures de changement d’échelle. Résultats attendus : Ces travaux devraient permettre de renforcer les capacités de surveillance et d’alerte précoce afin d’affiner les plans de prévention et de gestion sanitaire tant d’un point de vue opérationnel que réglementaire.
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